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微型P4SPR分子相互作用分析仪
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表面等离子体共振(SPR)是一种生物分析技术,可以实时研究生物和化学相互作用,而无需对分析物进行标记。该技术允许对分子之间的结合速率和结合水平进行观察,从而可以确定相互作用的特异性,动力学和亲和力。SPR 技术有几个应用,包括:
· 筛选和开发新药物和新的生物疗法
· 生物过程监测中的质量控制
· 开发新的诊断分析
· 基础研究,如发现和表征蛋白质功能和疾病机制

典型的SPR 传感器是金属薄膜,通常是涂覆在玻璃棱镜上的金(Au)或银(Ag),其中光被反射以产生SPR 效应。 含有生物分子或化学物质等目标的样品溶液位于SPR 传感器的顶部。 SPR 传感器的敏感区域由SPR 效应产生, 该效应是由玻璃棱镜中的入射光和金属传感器的自由电子之间的耦合效应引起的。 自由电子的振荡(称为消逝波)穿透约200nm 进入样品溶液, 并沿传感器平面传播几微米。 该探测区域对由分子引起的折射率(RI)变化高度响应,例如对于结合事件,化学浓度梯度,聚合物改变构象等。

SPR 效应指的是通过在玻璃与 Au 薄膜界面处反射的光里取得的反射光谱。 SPR 信号的特点在于当波长扫描或角度扫描达到一个特定值时,反射率会急剧下降。 最常见的SPR 传感器是贵金属,例如Ag Au,其中SPR 效应发生在可见光谱范围。 SPR 传感器的实际结构是通过沉积50nm 厚的薄膜在玻璃基板上。 由于其化学稳定性,Au 一般相对Au 是优先的选择。

SPR 效应不仅在薄膜传感器中观察到,而且在纳米粒子,纳米孔阵列和其他更奇特的SPR 传感器设计中也有类似的效应。在文献中薄膜SPR 通常表现出更高的灵敏度。因此,薄膜仍然是商用SPR 开发的基准,受益于它的低成本制造可扩展性,高分析性能可重复性和仪器灵活性。与其他方法相比更易于小型化和集成。  


P4SPR 技术的核心是基准薄膜SPR 传感器,可提供高质量的SPR 数据。 Kretschmann 配置SPR 装置能够在复杂介质中直接检测。 它几乎不需要样品制备,节省了用户在纯化试剂盒和试剂上的成本。 此外,P4SPR 利用薄膜SPR 的高灵敏度和更深的穿透深度,从而拓宽了该技术的应用范围。

多通道微流体设计通过同时采集三次测量以及每个芯片的参考。 4 通道微流体系统通过微量移液管在直接注射模式下需要50 微升的最小样品量。 除了低量注射之外,在微流体室中可以实现缓慢动力学的长接触时间,而没有由于蒸发引起的任何变化。 参考通道可实时测量由于温度和体积折射率引起的变化,用于后处理分析中的样品校正。 这一独特功能可在每次测试和分析时提高数据质量和易于分析的可靠信息

此外,P4SPR 模块化设计适合与荧光光谱,SERS,MS 和电化学等分析方法集成。 P4SPR 的便携性可用于现场测试,如对污染水进行环境测试。在空间有限的传统学术研究实验室和医院实验室都有现实的示例部署。

 

P4SPR 应用

SPR 不仅是生物分子相互作用的强大技术,也有许多在生物传感和其他应用的领域,如材料测试, 生物制造或食品和饮料等既定领域。 新的SPR 设备降低了传统SPR 系统的成本和复杂性,使研究人员能够轻松获得SPR 的无标记传感和实时监测能力。微型化可提供新抗体的结合亲和力和活性,适体或肽的分析开发,临床样品中的治疗药物监测以及光谱学或色谱系统集成,减少测试时间和为新兴领域提供新的分析方法。



TECHNICAL SPECIFICATIONS

· Dimensions in mm: 175 x 155 x 55

· >Weight of < 1.3 kg

· USB powered

· Microfluidic cell min. volume: 150 uL

· Sensitivity typical for gold thin film-based SPR

· Resolution of 1 micro refractive index unit

· Dynamic range from 1.30 to 1.39 refractive index unit

· Coefficient of variation on signal of > 0.6%

· Polychromatic light source

· Labview as control software (open source)

· Compatible with Ridgeview’s TraceDrawer

FEATURES & BENEFITS 

· Portable / Accessible

· Precise with triplicate and reference

· Direct detection in complex media

· Can be integrated with other analytical techniques (e.g., HPLC, MS, Raman, Fluo)

· Low maintenance

· Robust

· Low Throughput

· Easy to use



P4SPR应用:

应用1:蛋白质-抗体相互作用

1.1 介绍

免疫检测通常用于检测临床研究、诊断试验和学术研究等领域生化标志物的存在和水平。目前有很多免疫检测法,但它们都依赖于抗体与其靶蛋白的特异性结合作用。抗体-蛋白结合动力学和强度携带着系统的特有信息,这些关键信息可以通过SPR的免疫检测格式收集。

SPR是一种强大的分析技术,可以快速地进行蛋白质组研究和药物发现,但它的高成本和复杂性限制了其在学术机构中的应用。

1.2 Affinité P4 SPR

Affinité P4 SPR通过使用简单、低成本和易于操作的设备使得该技术能够推广开来,并且降低了SPR的应用障碍。

紧凑型P4 SPR(占地面积相当于一本书)可以轻松地安装在实验台上,并在几分钟内由任何人(本科生到宇航员,高级化学家到业余科学家)操作。此款P4 SPR的强大设计提供给我们从几分钟到几小时独特且灵活的检测时间,以此适应广泛的生物分子相互作用动力学。

Affinité技术已通过前列腺癌(PSA /抗PSA)、酶检测(β-内酰胺酶)和免疫球蛋白等的一系列蛋白-抗体相互作用的验证,并且适用于无标记格式的ELISA分析。我们的防垢技术能够在包括血清和血浆在内的复杂生物流体中提供高信噪比,能够充分满足您的蛋白质-抗体相互作用的监测需求。

1.3 分化抗原64(CD64)/lgG Fab

  Fab修饰的SPR芯片上CD64的滴定曲线


应用2:蛋白质-核酸相互作用

2.1 介绍

DNA、RNA和PNA等核酸可以采用同蛋白质活性位点相结合的活性结构。与蛋白质-抗体结合类似,蛋白质-核酸(NA)的结合也能够表现出不同的亲和力,而这种亲和力可以通过改变NA序列来调节。设计一个NA序列,从而达到与靶蛋白的特异亲和力范围,这种筛选策略被应用于个性化医疗等新兴领域。SPR是一种强大的无标记技术,能够提供蛋白质-NA结合动力学数据,从而应用于了解和调节核心细胞过程(如转录调控)的学术和临床研究。

2.2 Affinité P4 SPR

Affinité的P4 SPR具有一种独特的方法,用来鉴定DNA上的结合配偶体,定量靶蛋白,并确定结合亲和力和结合动力学。简单的NA固定技术和易于操作的仪器设备,令上述方法能够让任何人(本科生到宇航员,高级化学家到业余科学家)在短短几分钟的培训时间里轻松领悟。

Affinité技术已经实现了对蛋白质-DNA相互作用的成功测定。在该项测试中,双链DNA片段被杂交在SPR芯片上。我们通过一种无标记方法检测到DNA与可溶性蛋白质之间的相互作用,该方法适用于任何巯基修饰的核酸链的检测。

2.3 Lacl 阻遏蛋白/双链DNA

利用双链DNA分步感测蛋白质


应用3:药物-受体相互作用

3.1 介绍

小型治疗药物(500-1000Da)是一种可能有助于调节生物过程的化合物,而且大部分治疗药物都属于这一类。表征小型治疗药物与其受体之间的相互作用是非常具有挑战性的,这是因为标记可以干扰相互作用,而无标记技术则受到了小分子量的挑战,但无标记表征却是药物筛选和药物选择性测定的关键。尽管存在潜在挑战,SPR仍能够实时监测药物-受体之间的相互作用。

3.2 Affinité P4 SPR

Affinité的P4 SPR具有一种独特的方法,用来识别小型治疗药物的结合配偶体并确定结合亲和力和结合动力学。简单的蛋白质固定技术和易于操作的仪器设备,令上述方法能够让任何人(本科生到宇航员,高级化学家到业余科学家)在短短几分钟的培训时间里轻松领悟。

Affinité技术已被验证可用于小型治疗药物的筛选。在该项筛选方案中,将CD36的his-tagged细胞外结构域通过Affinité的金属-NTA表面化学性表达和固定在PR芯片上。封闭表面以后,在临床前试验环境中通过滴定小分子来确定药物-受体之间的KD。

3.3 分化抗原32/配体

CD36/小分子配体的量效曲线

上图为CD36相对于不同小分子配体的量效曲线,只要将数据点拟合到Langmuir等温线上即可确定小分子配体/受体的KD值。





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